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关于捷易
上海捷易生物科技有限公司(Shanghai Gemple Biotech Co.Ltd)于2010年3月,由国内外知名学府的多名生命科学和临床医学从业者始立。公司落户在张江高科生物医药核心园区,专注于新一代技术在遗传病的临床检测以及科研转化两大领域的产业化应用。捷易长期致力于遗传病从分子诊断到疾病建模—遗传疾病转化研究整体服务解决方案。 公司简介 合作伙伴 团队建设 加入捷易 企业顾问 联系我们 新闻中心
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Minigene验证服务



1.Minigene技术简介


可变剪接是调节基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制,是导致真核生物基因和蛋白质数量较大差异的重要原因,Pre-mRNA剪接是真核生物基因表达的关键步骤,其剪接异常直接影响蛋白的结构和功能。随着新一代测序技术的发展,大量的潜在致病变异被发现,根据文献报道,大约1/3的致病变异会导致pre-mRNA剪接异常,且大部分致病变异的临床意义是未知的。


Minigene技术是一种研究基因变异对可变剪接影响的体外功能验证技术。该技术通过将带有变异基因的外显子片段的质粒载体转染细胞后,利用RT-PCR及Sanger测序检测异常mRNA产物,进而分析基因变异对pre-mRNA可变剪接的影响(如内含子保留和外显子切除)。



2.Minigene技术原理






3.Minigene技术应用案例 I


案例1:Minigene技术验证成人原发性肌张力障碍THAP1基因突变导致剪切异常

Vemula S R, Xiao J, Zhao Y, et al. A raresequence variant in intron 1 of THAP1 is associated with primary dystonia[J].Molecular Genetics & Genomic Medicine, 2014, 2(3):261-272.


THAP1c.71 + 9 C>A变异(内含子上点突变),造成剪切异常,导致2号外显子不完全剪切,3号外显子增加,从而影响细胞生长周期。




3.Minigene技术应用案例 II


案例2:Minigene技术验证瓜氨酸血症ASS1基因变异导致可变剪接异常

KimaniJ K, Wei T, Chol K,et al. Functional analysis of novel splicing and missense mutations identifiedin the ASS1,gene in classical citrullinemiapatients[J]. ClinicaChimicaActa,2015, 438:323-329


家族1:ASS1c.174+1G变异(内含子上点突变),造成剪切异常,4Exon跳跃,生成截短蛋白; c.422T>G变异(外显子上点突变),造成两种剪接异常,7Exon跳跃和7Exon不完全剪切。



3.Minigene技术应用案例 III




家族2:ASS1c.773+1G>A变异,造成两种剪接异常,即11Exon跳跃和11号内含子保留c.793C>T变异未引起异常剪接。



项目周期:6-8

客户提供:携带检测突变DNA样本,正常DNA样本

结果交付:

1)构建的载体;

2)实验报告:包括实验步骤,引物序列,测序峰图,结果图片和分析结果